操作步驟： 挑取菌苔穿刺接種于SIM培養(yǎng)基中，穿刺接種約1/2深度；用相同的方法接種福氏志賀氏菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特氏菌，之后放置于36℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h。 結(jié)果觀察： 1.接種福氏志賀氏菌的試管穿刺線清晰，未擴(kuò)散，說明該菌無鞭毛，無動(dòng)力； 2.接種鼠傷寒沙門氏菌、單增李斯特氏菌、大腸埃希氏菌穿刺線周圍有明顯的擴(kuò)散現(xiàn)象，說明這類菌有鞭毛，有動(dòng)力。 3.接種鼠傷寒沙門氏菌的試管變黑，其他試管無變黑，這是因?yàn)槟承┘?xì)菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng)生成黑色的硫化亞鐵沉淀。 然后再滴加Kovacs靛基質(zhì)試劑2-4滴于培養(yǎng)基表面，靜置10min，觀察試驗(yàn)結(jié)果： 1.接種大腸埃希氏菌的試管上層有變紅，這是因?yàn)樵摼芊纸馍彼?，生成吲哚，吲哚與Kovacs靛基質(zhì)試劑中的對二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。 2.接種福氏志賀氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、單增李斯特氏菌無變紅現(xiàn)象。

操作步驟： 1.用接種環(huán)蘸取純培養(yǎng)物，同時(shí)穿刺接種兩只生化管。 2. 其中一只生化管加蓋1cm后的滅菌液體石蠟，另一只不加。 3. 將兩只接種菌株的生化管用封口膜包裹封口。 4. 36?1℃培養(yǎng)18-24h后觀察試驗(yàn)結(jié)果。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷： 1. 大腸桿菌為發(fā)酵型細(xì)菌，在有氧或無氧環(huán)境中都能分解葡萄糖產(chǎn)酸，所以兩支生化管均變黃。 2. 銅綠假單胞菌為氧化型細(xì)菌，在無氧環(huán)境中不能分解葡萄糖，所以加蓋石蠟的生化管不變黃，而不加石蠟的生化管變黃。 3. 糞產(chǎn)堿桿菌為產(chǎn)堿型細(xì)菌不能分解葡萄糖，所以兩支生化管均不變黃。

配制要點(diǎn)： 1、加入時(shí)需注意不斷搖晃錐形瓶，使試劑分布均勻。 2、加入卵黃時(shí)溫度一定不能太高，否則卵黃變性，培養(yǎng)基將無法使用。 3、倒平板時(shí)盡量不要太厚，否則將不容易觀察結(jié)果。 結(jié)果觀察： 蠟樣芽孢桿菌：菌落為微粉紅色，周圍有淡粉紅色沉淀環(huán)；枯草芽孢桿菌：黃色菌落，無沉淀環(huán)；大腸桿菌，被抑制，不生長。

操作步驟： 1.取細(xì)菌的新鮮培養(yǎng)物，用接種環(huán)接種于生理鹽水管中，振蕩混勻。 2.按照10倍系列稀釋法制備菌液，取接種量為10-100cfu的菌懸液，進(jìn)行試驗(yàn)。 3. 用移液槍吸取100μL稀釋好的菌液接種到MUG培養(yǎng)基管中，接種兩個(gè)平行管，同時(shí)吸取100μL生理鹽水接種到MUG培養(yǎng)基管中作為空白對照。 4. 相同的方法接種其他菌株，之后放置于30-35℃培養(yǎng)5-24小時(shí) 結(jié)果觀察： 發(fā)現(xiàn)接種大腸埃希氏菌和陰溝腸桿菌的試管變渾濁。而接種金黃色葡萄球菌的試管為澄清狀態(tài)。 葡萄糖醛酸苷酶檢測： 在黑暗環(huán)境中，使用366nm紫外燈照射培養(yǎng)后的試管，發(fā)現(xiàn)接種兩株大腸埃希氏菌的試管均產(chǎn)生藍(lán)白色熒光，這是因?yàn)镸UG的β-糖醛酸苷鍵被大腸埃希氏菌產(chǎn)生的葡萄糖醛酸苷酶水解，釋放出4-甲基傘形酮，4-甲基傘形酮在紫外燈下可產(chǎn)生藍(lán)白色熒光。 而接種陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)管無藍(lán)白色熒光，說明這兩株菌不能產(chǎn)生葡萄糖醛酸苷酶。 靛基質(zhì)試驗(yàn)： 向培養(yǎng)后的試管滴加Kovacs靛基質(zhì)試劑2-3滴，立即觀察結(jié)果，也可以放置室溫5-10min觀察結(jié)果。發(fā)現(xiàn)接種兩株大腸埃希氏菌的試管均有紅色環(huán)產(chǎn)生，這是因?yàn)榈鞍纂酥械纳彼岜淮竽c埃希氏菌產(chǎn)生的色氨酸酶分解，形成靛基質(zhì)。靛基質(zhì)與Kovacs靛基質(zhì)試劑反應(yīng)，形成紅紫色醌式化合物，即紅色環(huán)。 而陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌培養(yǎng)管有黃色環(huán)，說明這兩株菌均不含有色氨酸酶。

操作步驟： 1.挑取實(shí)驗(yàn)菌苔接種于生理鹽水管中，制備菌懸液，本實(shí)驗(yàn)以大腸埃希氏菌、單增李斯特氏菌、產(chǎn)氣腸桿菌為例，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)； 2.然后用移液槍吸取100ul菌懸液，接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基中，每種菌接種2個(gè)試管； 3.之后放置于36℃培養(yǎng)24-48h。 MR實(shí)驗(yàn)： 向試管中滴加3滴甲基紅試劑，觀察顏色變化，接種大腸桿菌和單增李斯特氏菌的試管變紅，為陽性反應(yīng)；接種產(chǎn)氣腸桿菌的試管不變紅，為陰性反應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)原理：不同細(xì)菌分解葡萄糖的產(chǎn)物不同，大腸桿菌、單增李斯特氏菌可分解葡萄糖產(chǎn)生大量酸，使pH值下降到4.5以下，所以滴入甲基紅顯紅色; 產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)酸較少，所以滴入甲基紅顯橙黃色。 VP實(shí)驗(yàn)： 另取試管，向試管中滴加V-P試劑A液（6%α-萘酚-乙醇溶液）9滴，B液（40%氫氧化鉀溶液）3滴，建議最低使用量為A液6滴、B液2滴。充分振蕩混勻，之后置于36?1℃培養(yǎng)0.5-4h。 培養(yǎng)結(jié)束后觀察結(jié)果，發(fā)現(xiàn)接種大腸桿菌的試管不變紅，為陰性反應(yīng)；接種單增李斯特氏菌和產(chǎn)氣腸桿菌的試管變紅，為陽性反應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)原理：產(chǎn)氣腸桿菌、單增李特氏菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，并使丙酮酸脫羧，生成中性的乙酰甲基甲醇，在堿性溶液中被空氣氧化生成二乙酰,繼續(xù)與培養(yǎng)基中的胍基反應(yīng)生成紅色化合物，即為V-P陽性。

什么是IMViC試驗(yàn)？ IMViC試驗(yàn)是一項(xiàng)重要的腸桿菌科生化實(shí)驗(yàn)，此實(shí)驗(yàn)包括四個(gè)生化， I ：indol 靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn) M： Methyl red 甲基紅試驗(yàn) V：Voges-Prokauer VP試驗(yàn) C: Citeate utilization 西蒙氏檸檬酸鹽利用試驗(yàn) 操作步驟： 第一步：制備菌懸液 挑取一環(huán)待測菌的菌懸液，接種于生理鹽水管中，用旋渦混合器振蕩混勻，制成均一的細(xì)菌懸液； 第二步：接種菌液至生化鑒定條 用酒精棉擦拭鑒定條表面及打孔器，之后依次打孔， 用移液槍吸取菌液，依次加入每個(gè)孔中，每孔100ul, 之后置于36℃?1℃培養(yǎng)24h。 第三步：滴加試劑，觀察結(jié)果 第1孔滴加靛基質(zhì)試劑1-2滴 第2孔滴加甲基紅試劑2-3滴 第3孔滴加VP試劑A液3滴，VP試劑B液1滴 結(jié)果觀察： 大腸埃希氏菌ATCC25922的生化特征為： 靛基質(zhì)陽性，有玫紅色環(huán) 甲基紅陽性，顯紅色 VP試劑陰性，不變紅 （VP試劑滴加后，需20分鐘后再觀察結(jié)果，如為變紅色需延長至4h觀察結(jié)果，如仍未變紅色才可判定為陰性） 西蒙氏檸檬酸鹽陰性，不變藍(lán)

DNA酶瓊脂 實(shí)驗(yàn)

美地寶 EAU彩色防滑路面