檢驗(yàn)原理： 通過(guò)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽(yáng)性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙，因此，能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過(guò)乙醇脫色后仍呈無(wú)色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。 操作步驟： 1. 涂片經(jīng)火焰固定，加（結(jié)晶紫溶液）溶液A染1分鐘，用清水沖去染液。 2.加（碘液）溶液B染1分鐘，水洗。 3.加（95%乙醇）溶液C，不時(shí)搖動(dòng)玻片約10-30秒，至無(wú)紫色脫落為止，水洗。 4.加（沙黃復(fù)染液）溶液D，染1分鐘，水洗。 5.干后油鏡鏡檢。陽(yáng)性菌呈紫色、陰性菌呈淡紅色。

為什么利用甘油來(lái)進(jìn)行菌種保存呢？ 甘油作為一種保護(hù)劑，可以降低水的凝固點(diǎn)，減少冰晶形成，從而防止冰晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。 方法一：直接挑取待測(cè)菌至液體菌種保存管 首先觀察平板上的菌落大小，若單個(gè)菌落在2-3mm，則挑取2-3個(gè)單個(gè)菌落， 若單個(gè)菌落較小，可挑取3個(gè)以上單個(gè)菌落，以保證菌種保存液濃度不小于3-4麥?zhǔn)媳葷岫取⑻羧〉木臃N至海博生物液體菌種保存管中，充分振蕩，然后蓋上蓋子，上下顛倒，使菌種與保存液充分融合，之后放入超低溫冰箱進(jìn)行保存。 方法二：吸取菌懸液接種至液體菌種保存管中 用移液槍吸取200ul菌懸液，接種至海博生物液體菌種保存管中， 用移液槍反復(fù)吹打，使其與保存液充分融合，操作完成后放入超低溫冰箱進(jìn)行保存。 保存溫度與保存時(shí)間的關(guān)系： 保存溫度越低效果越好，-20℃一般可保存一年以上，-70℃一般可保存兩年以上。 注意事項(xiàng)： 反復(fù)凍融易導(dǎo)致菌株死亡，融化后的保存管不可再進(jìn)行冷凍保存。

改良克氏雙糖鐵培養(yǎng)基中含有少量的葡萄糖和大量的山梨醇，常用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的檢驗(yàn)。 首先，用接種針挑取試驗(yàn)菌苔，“之”字劃線接種于改良克氏雙糖鐵培養(yǎng)基斜面處，之后底層穿刺，穿刺約培養(yǎng)基1/2深度。 本試驗(yàn)以鼠傷寒沙門氏菌、普通變形桿菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、福氏志賀氏菌為例進(jìn)行試驗(yàn)。之后放置于25℃需氧培養(yǎng)24小時(shí)。 實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象及原理解釋： 培養(yǎng)結(jié)束后取出試管觀察，發(fā)現(xiàn)接種鼠傷寒沙門氏菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的試管斜面及底層均為黃色，這是因?yàn)檫@兩種細(xì)菌能發(fā)酵葡萄糖及山梨醇，產(chǎn)生大量酸，pH下降培養(yǎng)基變黃； 普通變形桿菌和福氏志賀氏菌斜面紅色底層黃色是由于細(xì)菌僅能發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)生少量酸，斜面處的酸受空氣氧化成堿性物質(zhì)使pH較高顯紅色，底層酸不被氧化顯黃色； 接種鼠傷寒沙門氏菌和普通變形桿菌的試管有氣泡產(chǎn)生且變黑，是由于產(chǎn)硫化氫細(xì)菌可還原硫代硫酸鈉、硫酸亞鐵生成硫化氫，與培養(yǎng)基中亞鐵離子反應(yīng)生成黑色的硫化亞鐵。

操作步驟： 1.用接種環(huán)挑取待測(cè)菌菌懸液或直接挑取菌落，劃線接種于可溶性淀粉瓊脂平板上。 2.同時(shí)接種陰性和陽(yáng)性對(duì)照菌株，陽(yáng)性菌株可用枯草芽孢桿菌，陰性菌株可用大腸埃希氏菌。 3.之后放置于36℃培養(yǎng)72-96小時(shí)。 4.培養(yǎng)結(jié)束后取出平板，滴加2-3滴盧戈氏碘液，輕輕晃動(dòng)平板使菌液均勻分布，觀察顏色變化。 結(jié)果觀察： 接種蠟樣芽胞桿菌和枯草芽孢桿菌的平板，遇碘菌落周圍不變藍(lán)，為陽(yáng)性反應(yīng)；接種大腸埃希氏菌的平板，遇碘菌落周圍變藍(lán)，為陰性反應(yīng)。

什么是蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)： 在GB4789.14標(biāo)準(zhǔn)中，在進(jìn)行蠟樣芽胞桿菌鑒定時(shí)蠟樣芽胞桿菌與蘇云金芽孢桿菌生化反應(yīng)相同，但蘇云金芽孢桿菌在形成芽孢的同時(shí)，會(huì)在芽孢旁形成一顆菱形、方形或不規(guī)則形的堿溶性蛋白質(zhì)晶體，稱為伴孢晶體，該晶體易被堿性染料著色，因此常用0.5%堿性復(fù)紅染料進(jìn)行染色觀察。而蠟樣芽胞桿菌和其他芽孢桿菌不產(chǎn)生伴孢晶體。這個(gè)染色實(shí)驗(yàn)就是蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)。 操作步驟： 培養(yǎng)芽孢：將待測(cè)菌株接種至硫酸錳營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，30?1℃培養(yǎng)24?2h，并于室溫放置3-4天。若芽孢產(chǎn)生不豐富，可在室溫繼續(xù)放置2-3天后觀察。 原理：芽孢桿菌在營(yíng)養(yǎng)條件缺乏時(shí)，開始形成芽孢，因此在進(jìn)行細(xì)菌產(chǎn)芽孢相關(guān)試驗(yàn)時(shí)，通常需進(jìn)行5-7天的放置或培養(yǎng)，待培養(yǎng)基內(nèi)營(yíng)養(yǎng)耗盡，可獲得更豐富的芽孢。 制片染色：挑取培養(yǎng)物少許于載玻片上，滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經(jīng)自然干燥，微火固定后，加甲醇作用 30 s 后傾去，再通過(guò)火焰干燥，于載玻片上滴滿 0.5%堿性復(fù)紅，放火焰上加熱（微見(jiàn)蒸氣，勿使染液沸騰)持續(xù) 1 min～2 min，移去火焰，再更換染色液再次加溫染色 30 s，傾去染液用潔凈自來(lái)水徹底清洗、晾干后鏡檢。觀察有無(wú)游離芽胞（淺紅色）和染成深紅色的菱形蛋白結(jié)晶體。 （注：在菌苔生長(zhǎng)密集的地方營(yíng)養(yǎng)消耗更快，更容易產(chǎn)生芽孢，因此挑取密集生長(zhǎng)處的菌苔制片易觀察到更多芽孢）

實(shí)驗(yàn)操作： 1、向上用力掀開塑料瓶蓋。將新鮮的羊血瓊脂平板底面劃分為20個(gè)~25個(gè)小格。 2、抬起鋁塑環(huán)，沿著鋁塑蓋上的刻痕，水平方向用力拉動(dòng)拉環(huán)。挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落刺種到血平板上，每格刺種一個(gè)菌落，并刺種陽(yáng)性對(duì)照菌(單增李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌)和陰性對(duì)照菌(英諾克李斯特氏菌)，穿刺時(shí)盡量接近底部，但不要觸到底面，同時(shí)避免瓊脂破裂。 3、36 ℃?1 ℃培養(yǎng)24h~48h。 結(jié)果觀察： 培養(yǎng)結(jié)束后于明亮處觀察：?jiǎn)卧隼钏固厥暇尸F(xiàn)狹窄、清晰、明亮的溶血圈；斯氏李斯特氏菌在刺種點(diǎn)周圍產(chǎn)生弱的透明溶血圈；英諾克李斯特氏菌無(wú)溶血圈；伊氏李斯特氏菌產(chǎn)生寬的、輪廓清晰的β-溶血區(qū)域。 將待測(cè)菌的溶血現(xiàn)象與對(duì)照菌對(duì)比，再結(jié)合其他生化鑒定實(shí)驗(yàn)即可判斷待測(cè)菌是否為單增李斯特氏菌。

產(chǎn)品介紹： 帶鐵絲的無(wú)菌采樣袋是一種安全、無(wú)污染的采樣袋容器，主要用于：環(huán)境取樣、生物醫(yī)學(xué)及制藥學(xué)研究、食品行業(yè)品質(zhì)檢測(cè)（QA/QC)應(yīng)用，以及臨床用藥和獸醫(yī)用藥等領(lǐng)域。 使用方法： 1.先撕開取樣袋上方的虛線封口。 2.拽住袋體兩側(cè)的短耳向外拉，開啟取樣袋口。 3.將樣本置于取樣袋中，本品袋子開口很大，樣品置入非常方便。 4.抓住兩邊的長(zhǎng)耳，使袋體兩內(nèi)表面靠近。 5.將取樣袋繞著拉耳鐵絲所在的直線旋轉(zhuǎn)3-4圈。 6.將兩個(gè)長(zhǎng)耳彎折在取樣帶上，并做好標(biāo)記即可。整個(gè)采樣過(guò)程方便快捷，且不會(huì)污染袋體內(nèi)部也不會(huì)漏液。 注意事項(xiàng)： 如果樣品量較多或者樣品特殊，不方便甩起來(lái)，也可直接將封口部分繞鐵絲旋轉(zhuǎn)、彎折進(jìn)行封口。

實(shí)驗(yàn)步驟： 1.首先取一支苯丙氨酸脫羧酶生化管，在易折點(diǎn)處掰開安瓿瓶，備用。 2.用接種針挑取待測(cè)菌落，劃線接種于苯丙氨酸脫羧酶生化管中。 3.用封口膜封口，放置于36℃需氧培養(yǎng)18-24小時(shí)。 4.培養(yǎng)結(jié)束后，向生化管斜面上滴加2-3滴苯丙氨酸指示劑。 結(jié)果判定： 陽(yáng)性菌：如普通變形桿菌，斜面會(huì)變成綠色。 陰性菌：如大腸桿菌，則變色。 實(shí)驗(yàn)原理： 有些細(xì)菌(如:普通變形桿菌)可以產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，能將苯丙氨酸脫氨變成苯丙酮酸，而苯丙酮酸能使三氯化鐵(苯丙氨酸指示劑)變綠色。